diplomski rad
Izoelektrično fokusiranje proteina stanične stjenke kvasca Saccharomyces cerevisiae

Vedran Gradvol (2009)
Sveučilište Josipa Jurja Strossmayera u Osijeku
Prehrambeno-tehnološki fakultet Osijek
Zavod za primijenjenu kemiju i ekologiju
Katedra za biokemiju i toksikologiju
Podaci o radu
NaslovIzoelektrično fokusiranje proteina stanične stjenke kvasca Saccharomyces cerevisiae
AutorVedran Gradvol
Voditelj/MentorIvica Strelec (mentor)
Sažetak rada
U ovom radu su nekovalentno i kovalentno vezani proteini stanične stijenke različitih mutanata kvasca koji su se razlikovali u proteinima stanične stijenke ekstrahirani pomoću 20 mM NaOH i 20 IU/μL -1,3-glukanaze, nakon čega je uslijedilo izoelektrično fokusiranje u gradijentu pH 3-10, te nespecifična i specifična detekcija proteina. Nespecifična detekcija proteina je provedena bojanjem srebrom, a specifična detekcija imunokemijski nakon kapilarno-difuzijskog prijenosa proteina na PVDF membranu. Nespecifičnom detekcijom proteina htjelo se ustanoviti da li postoje razlike u količini ekstrahiranih proteina i rasporedu proteinskih vrpci različitih mutanata kvasca, a imunokemijskom detekcijom se htjelo utvrditi prisustvo nekovalentno vezanih proteina Scw4p, Scw10p, Scw11p i Bgl2p označenih hemaglutininskim epitopom. Iz provedenog izoelektričnog fokusiranja, odnosno nakon nespecificne detekcije bojanjem srebrom mogu se uočiti razlike u ekspresiji proteina pojedinih mutanata kvasca u vidu razlika u intenzitetu pojedinih proteinskih vrpci, dok istovremeno nema evidentnih razlika u samom rasporedu proteinskih vrpci. Prilikom razdjeljivanja proteina došlo je i do taloženja proteina na mjestu nanošenja što se otklonilo dodatkom Tritona X-100 u uzorke ekstrahiranih proteina. Imunokemijskom detekcijom pokazano je nespecifično vezanje proteina što je vjerojatno uzrokovano pucanjem stanica kvasca prilikom ekstrakcije i nespecifične reakcije unutarstaničnih proteina sa HAprotutijelima.
Ključne riječiproteini Saccharomyces cerevisiae stanična stijenka kovalentno vezani proteini nekovalentno vezani proteini izoelektrično fokusiranje imunokemijska detekcija
Naslov na drugom jeziku (engleski)Isoelectric focusing of Saccharomyces cerevisiae cell wall proteins
Povjerenstvo za obranuMarija Halt
Ivica strelec
Vladimir Mrša
Hrvoje Pavlović
Ustanova koja je dodijelila akademski/stručni stupanjSveučilište Josipa Jurja Strossmayera u Osijeku
Prehrambeno-tehnološki fakultet Osijek
Ustrojstvena jedinica niže razineZavod za primijenjenu kemiju i ekologiju
Katedra za biokemiju i toksikologiju
MjestoOsijek
Država obraneHrvatska
Znanstveno područje, polje, granaBIOTEHNIČKE ZNANOSTI
Prehrambena tehnologija
Inženjerstvo
Vrsta studijasveučilišni
Stupanjdodiplomski
Naziv studijskog programaPrehrambena tehnologija i procesno inženjerstvo
Akademski / stručni nazivdiplomirani inženjer prehrambene tehnologije i procesnog inženjerstva
Kratica akademskog / stručnog nazivadipl. ing.
Vrsta radadiplomski rad
Jezik hrvatski
Datum obrane2009-09-30
Sažetak rada na drugom jeziku (engleski)
Covalently and noncovalently linked cell wall proteins from different yeast protein mutants were extracted with 20 mM NaOH and 20 IU/μL -1,3-glucanase. Extracted proteins were separated by isoelectric focusing in a pH gradient of 3-10, and subsequently nonspecific and specific detection was carried out. Nonspecific detection was achieved by silver staining and specific detection was achieved immunochemically after the transfer of proteins to a PVDF membrane. The goal of nonspecific detection was to determine the differences in the quantity of extracted proteins and/or position of protein bands for the different yeast mutants, and the goal of specific detection was to determine the presence of noncovalently linked proteins Scw4p, Scw10p, Scw11p and Bgl2p tagged by haemaglutinin. Silver stained gels showed differences in protein expression of different yeast mutants that can be seen as differences of protein band intensities, but there were no evident differences in protein band positions of different yeast mutants. Protein precipitation during sample entry was omitted by addition of Triton X-100 in all samples of extracted proteins that increased protein solubility. Immunochemical detection showed nonspecific reaction of HA-antibodies with yeast proteins which was probably caused by the release of intercellular proteins after cell breakage during extraction.
Ključne riječi na drugom jeziku (engleski)protein Saccharomyces cerevisiae cell wall covalently linked proteins noncovalently linked proteins isoelectric focusing immunochemical detection
Vrsta resursatekst
Prava pristupaRad dostupan samo djelatnicima i studentima matične ustanove
Uvjeti korištenja radahttp://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
URN:NBNhttps://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:109:677405
PohranioSanda Hasenay